【作 者】：网站采编
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【摘 要】：文章目录 1 材料与方法 1.1 材料 1.2 方法 1.2.1 细胞培养 1.2.2 CCK-8检测Met对细胞活力的影响 1.2.3 流式细胞仪检测细胞凋亡 1.2.4 EdU实验 1.2.5 克隆形成实验 1.2.6 细胞周期的检测 1.2.7 光学显微

文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

    1.2.1 细胞培养

    1.2.2 CCK-8检测Met对细胞活力的影响

    1.2.3 流式细胞仪检测细胞凋亡

    1.2.4 EdU实验

    1.2.5 克隆形成实验

    1.2.6 细胞周期的检测

    1.2.7 光学显微镜观察Met对细胞形态的影响

    1.2.8 SA-β-gal染色实验

    1.2.9 Western blot检测相关蛋白的表达

    1.2.10 ELASA检测PP2A酶活性

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 Met对结直肠癌细胞的抑制作用

2.2 Met对结直肠癌细胞凋亡的影响

2.3 低剂量Met抑制结直肠癌细胞克隆形成

2.4 低剂量Met抑制结直肠癌细胞的增殖

2.5 Met诱导结直肠癌细胞G0/G1期阻滞

2.6 Met诱导细胞中SA-β-gal活性增加

2.7 Met通过PP2A相关通路诱导结直肠癌细胞衰老

2.8 PP2A激活参与Met诱导的结直肠癌细胞衰老

3 讨论

文章摘要:目的明确二甲双胍（1,1-二甲基双胍盐酸盐,Met）是否通过诱导细胞衰老抑制结直肠癌细胞增殖,并初步探讨其诱导细胞衰老的机制。方法以不同浓度Met（0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L）处理结直肠癌LOVO、SW480细胞,采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期。根据凋亡结果将实验分为对照组、5.0 mmol/L Met组（n=3）,采用EdU和克隆形成实验检测细胞增殖,衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色检测细胞衰老代谢,ELASA检测蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）酶活性,Western blot检测蛋白表达。用PP2A抑制剂LB-100联合Met处理细胞并分为对照组、Met组、Met+LB-100组、LB-100组（n=3）,再次用CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖,SA-β-ga1染色检测细胞衰老情况。结果 Met以浓度和时间依赖方式显著抑制结直肠癌细胞LOVO、SW480增殖（P<0.05）;低浓度（≤5.0 mmol/L）Met作用下,细胞无明显凋亡,但有明显增殖抑制和G₀/G₁期阻滞;细胞呈大而扁平、空泡化增多的典型衰老样态,衰老标志SA-β-gal阳性细胞明显增加[LOVO:对照组（5.43±1.37）%,Met组（17.56±1.89）%,P<0.001;SW480:对照组（8.49±2.12）%,Met组（20.02±3.68）%,P<0.001];此时,PP2A蛋白表达无改变,但磷酸化水平显著降低,PP2A酶活性则显著升高（P<0.05）,其下游AKT蛋白磷酸化水平降低,衰老相关蛋白P53、P21等表达明显增加。PP2A抑制剂LB-100联合Met处理后,可明显逆转Met对细胞增殖的抑制,并延缓Met诱导的细胞衰老[LOVO:Met组（10.55±1.86）%,Met+LB-100组（3.48±0.85）%,P<0.001;SW480:Met组（20.07±4.89）%,Met+LB-100组（8.61±1.68）%,P<0.001]。结论低浓度Met可通过PP2A/AKT通路诱导细胞衰老从而抑制结直肠癌细胞增殖。

文章关键词:

论文DOI:10.16016/j.1000-5404.202103252

论文分类号:R735.34

文章来源：《预防医学情报杂志》 网址: http://www.yfyxqbzzzz.cn/qikandaodu/2021/1017/669.html